一、实验背景

摇瓶培养：玻璃三角瓶内传代培养，30ml摇瓶接种密度是：0.8×10E6 cells/ml，传代时间两天左右
摇瓶产量：密度每天倍翻，一般长到在4-6×10E6，30ml，最高长到6-8×10E6，表达量200-300ug/ml左右，扩大体积培养后蛋白产量下降。
二、培养条件（实际操作中的控制参数）
设备型号：BioWill™Lab-5L生物反应器             
细胞名称（注明来源）：CHO工程细胞，自己转染构建的
蛋白名称（注明胞内或分泌）：一种融合蛋白，胞外分泌型
接种细胞数：0.8×10E6 cells/ml，1000ml
细胞生长期培养液（糖含量）：HyQ SFM4CHO，6.74g/L
接种后细胞维持培养液：
细胞生长期DO：50%                     
细胞生长期pH ： 7.2               
细胞生长期T：37℃                      表达期T：34℃
转速度：60rpm
细胞培养期：  共6天
表达培养期：共4天
收获体积：3L
三、简述过程
   接种过程：准备好细胞种子密度为0.8×10E6 cells/ml，活率90%，1000ml打入接种瓶内，置于37度培养箱内。在层流罩连上接种瓶打入种子细胞，留少许检菌，设置好参数，启动自动运行状态，每天根据细胞密度、残糖量、渗透压补加培养基、浓缩液和碱。
   表达过程：到后期，细胞密度和体积到达要求后，降温转表达。
四、培养的耗糖检测：
 

 

耗糖曲线图（附上曲线图）：

 
五、蛋白表达检测：
1、每天取样后做ELISA检测蛋白表达曲线如下

 
六、实验总结与分析（实验中出现的问题及解决方法）
1、细胞培养过程中每天取样，观察细胞状态，检测残糖及渗透压，计数及活率，根据细胞密度及耗糖补加培养基和浓缩液。细胞增殖正常，活率正常。
2、蛋白表达伴随整个细胞生长过程，当活率低于80%时收获下罐，以免其他代谢杂质增多不利于后期蛋白分离纯化。
3、在生物反应器上扩大培养后，细胞达到体积大规模的同时密度明显提高，且工艺参数（相比于摇瓶）控制更稳定，表达量也能明显提高。
4、后期补加的培养基及浓缩包，由于配制放置时间过久，可能多肽及谷氨酰胺等营养物质有部分分解，导致影响后期细胞生长及蛋白表达，存在进一步优化工艺的空间。
七、客户意见（针对产品或需要改进的地方）
1、满意。
2、由于客户工艺信息需要保密，部分数据删除，本总结仅做工艺分析总结用。