用BioWill™SUS-50L生物反应器培养Marc-145细胞并接种PRRSV，检测毒价
二、培养条件（实际操作中的控制参数）
设备型号：BioWill™SUS-50L生物反应器   
纸片载体：800g
细胞接种量：8*10E9 cells（9个10L转瓶的细胞）
1、细胞生长液：DMEM+8%FBS+1%PS
细胞生长期DO：50%
细胞生长期pH ：7.2
细胞生长期T：37℃
       培养时间：96h
2、接种蓝耳病毒培养
细胞维持液：DMEM（高糖）+2%FBS+1%PS
病毒繁殖生长期DO：60%
病毒繁殖生长期pH：7.4
病毒繁殖生长期  T：35℃
       接毒量：TCID₅₀为6.5的种毒1000ml，MOI：
       培养时间：48h
三、简述培养过程
接种/培养过程：打出罐内浸泡电极和纸片载体的无菌PBS，打入培养基40L，调节合适参数，预培养24h做无菌检验。接种种细胞，并测原始糖浓度；接种后每24h测糖，48h时开始每天换液来维持细胞生长，根据耗糖量进行换液量。
接毒/培养过程：将培养基打出，然后将含2%血清的培养基40L打到反应器中并加热到35℃，TCID50为6.5的种毒1000ml反应器接毒，接毒24h后取样测糖，根据实际情况补加糖和浓缩包。
取样/收毒过程：接毒24h取样测糖、毒价，每隔2h取毒样一次，每次取冻存2份；细胞病变脱落开始收毒冻融。
四、培养的耗糖检测：
     实验数据如下：

时间h	耗糖量g/d	耗碱量L/d	备注
0	0	0	接种细胞
24	40	0.35
48	93	0.79	换生长液30L
72	116	1.56	换生长液40L
96	140	1.81	换维持液40L，接毒1L
120	157	2.24	补（2*DMEM+150g糖/瓶）1L
144	146	1.96	补（2*DMEM+150g糖/瓶）0.7L

耗糖曲线图如下：
 
耗碱曲线图如下：
 
 
五、总结与分析（出现的问题及解决方法）
（一）结果
接毒毒价检测结果：

时间 （h）	种毒	26	30	32	34	36	38	40	42	44	48
滴度	6.5			7.37	7.9	8.5	8.03	7.0

 
注：   红色数字为毒价最高点
 
（二）分析
     1、整个培养过程共用：生长液110L，维持液40L，双抗1.2L，谷氨酰胺1L，血清9.6L，浓缩液1.7L，碱8.71L，葡萄糖300g，收获毒液45L，最高毒价在36h为8.5。
    2、本次使用的种毒毒价为6.5，最高毒价出现在36h，为8.5。病毒滴度显著提高。
3、本次反应器细胞准备期间，使用的为草原绿野特级新生牛血清，上罐前细胞状态正常，耗糖正常，上罐后血清量为8%，维持液为2%。
 
（三）问题及解决办法    
    由于客户工艺信息需要保密，故部分数据做删除。